การดองใส
การดองใสเปนเทคนคทิ ี่ใชในการเก็บรักษาตัวอย่างส ิ่งมีชีวิต เพื่อศึกษาโครงสรางภายใน
โดยการทําให้เนื้อเยื่อตัวอย่างใส และยอมสีสวนที่ตองการศึกษา เชน
- การดองใสตัวอยางสัตวมีกระดูกสันหลังขนาดเล็ก เพื่อศึกษาการเจริญเติบโตของกระดูก
ออน กระดูกแข็ง และศึกษาความผิดปกตของโครงสรางกระดูกเนื่องจากไดรับสารเคมี โดยกระดูกอ่อน
ติดสีฟ้าของ alcian blue และกระดูกแข็งติดสีแดงของ alizarin red S สวนลําตัวใส ได้แก่ตัวออนหนู ปลา
กบ หรือโครงกระดูกตัวออนสัตวที่อยู่ในท้อง
- การดองใสตัวอยางสัตวไมมีกระดูกสันหลังขนาดเล็ก เพื่อศึกษาอวัยวะภายในโดยลําตัวใส
อวัยวะภายในสีน้ําตาลเข็มถึงดํา ได้แก หนอนพยาธิ ลูกน้ํา เห็บ ไร แมลงและแมลงใตดิน หรือศึกษาผนัง
หุมลําตัว (เปลือก) โดยเปลือกออนติดสีฟ าของ alcian blue และเปลือกแข็งติดสีแดงของ alizarin red S
ไดแก กุง กั้ง
วิธีทํา
1. นําตัวอยางลางดวยน้ําให้สะอาด
2. แชใน FAA นาน 40 นาทีถึง 2 ชั่วโมง
3. ลาง FAA ออกดวยน้ํากลั่น 3 ครั้งๆละ 10 นาที
4. ยอมสีกระดูกออนดวย alcian blue solution นาน 36-48 ชั่วโมง หรอตามขนาดของตัวอยาง
โดยสังเกตเปลือกหุมลำตัวติดสีฟ้าประมาณ 7 วัน
5. เปลี่ยนมาแชใน 95% alcohol, 70% alcohol, 50 % alcohol, 30 % alcohol และ น้ํากลั่นตามลําดับ
ขั้ นตอนละ 2 ชั่วโมง
6. เปลี่ยนมาแชใน trypsin solution นาน 6-72 ชั่วโมง แลวแต ขนาดตัวอย่าง โดยสังเกตเห็นเนื้อเยื่อใส
จากบริเวณขอบดานนอกของลําตัวเขาดานในของลําตัว (ลักษณะเนื้อเยื่อลำตัวตัวสัตวมีสีขาวขุน)กะให
เนื้อเยื่อใสประมาณครึ่งหนึ่งของลําตัว และถาเนื้อเยื่อใสมากเกินไปอาจจะเปอยในขนตอนต ั้ อไป
7. เปลี่ยนมาแชใน 0.5% KOH ที่เติม alizarin red S ที่ละหยดจนเป็นสารละลายสีมวงเขมเพื่อยอม สีกระดูกแข็ง นาน 24 ชั่วโมง หรือกระดกแข ู ็งติดสีแดงเขมตามตองการ และ 0.5% KOH ชวยใหเนื้ อเยื่อ
ลําตัวใสเพิ่มขนอึ้ ีก
8. เปลี่ยนมาแชในสารละล าย 0.5% KOH: glycerol (3:1) นาน 24 ชั่วโมง
เปลี่ยนมาแชในสารละลาย 0.5% KOH: glycerol (1:1) นาน 24 ชั่วโมง
เปลี่ยนมาแชในสารละลาย 0.5% KOH: glycerol (1:3) นาน 24 ชั่วโมง
9. เปลี่ยนมาแชใน glycerol เก็บรักษาและใส thymol 2-3 เกล็ด เพื่อป้องกันเชื้อรา
ไม่มีความคิดเห็น:
แสดงความคิดเห็น